雷帕霉素通路在抗磷脂抗体综合征肾病中起重要作用

2014-08-15 21:50 来源:丁香园 作者:任婷婷
字体大小
- | +

抗磷脂抗体综合征是一种自身免疫性疾病,以血液中存在抗磷脂抗体为特征,此抗体可导致血栓形成并引起产科并发症。抗磷脂抗体综合征可单独存在或是与系统性红斑狼疮等其他自身免疫疾病共存。

血栓是抗磷脂抗体综合征的主要并发症,为了减少血栓的形成,患者通常要长期抗凝。然而,抗凝并不能减少高危患者器官损害和死亡的发生。尤其对那些灾难性抗磷脂抗体综合征的患者而言,除血栓外还可出现血管细胞受损、内皮纤维化和中膜增厚等病理改变。这些改变不仅可以出现在抗磷脂抗体综合征肾病中,也可以出现在那些患有心肌梗塞、休克及肠系膜血栓的患者的血管中。

哺乳动物的雷帕霉素靶点(mTOR)是一种可以整合多种信号通路来调节细胞的生长繁殖的激酶,由mTOR c 1 (mTORC1) 和mTOR 2 (mTORC2)两个相互独立的复合体组成;这两种复合体的相互作用活化了相应的通路。

对行动脉血管成形术的动物模型及患者进行研究发现,mTORC在血管狭窄中起到了关键作用,而这种狭窄多是由于机械性内皮损伤造成的。有研究表明雷帕霉素可以抑制mTORC通路并阻止或减少损伤后的内膜形成。近年来,这一药物主要用于抑制冠脉支架后再发动脉狭窄。

基于以上研究认为,mTORC通路的活化在抗磷脂抗体综合征肾病特征性血管改变方面起到了一定的作用。

研究以原发性抗磷脂抗体综合征肾病并行肾活检的患者、继发性抗磷脂抗体综合征肾病与狼疮肾重叠的患者、有狼疮肾炎但没有抗磷脂抗体综合征的患者为研究对象,并使用因肿瘤而行肾切除但有正常肾组织的患者作为对照组。从2000年1月到2009年12月,研究者所在医院共行1359例肾移植,其中37人抗磷脂抗体阳性;并抽取74个行肾移植但抗磷脂抗体阴性的患者为对照组。

随访截至2012年1月,平均随访时间为82±35个月。所有受试者被随机分为2组,一组使用糖皮质激素,钙神经蛋白抑制剂和嘌呤抑制剂,另一组使用糖皮质激素、雷帕霉素和嘌呤抑制剂。行肾移植的抗磷脂抗体阴性的74个患者中有18人使用雷帕霉素,而抗磷脂抗体阳性的37个人中有10个人使用雷帕霉素。

在移植术后第3个月、第12个月时行肾活检,同时检查肾小球滤过率。用免疫组化、免疫荧光和共定位分析来评估AKT 和S6RP的磷酸化。用血肌酐水平和碘海醇清除水平来评估肾功能。使用方差分析、Tukey–Kramer测验、Mann–Whitney方法及Kaplan–Meier方法处理相关数据。

通过对S6RP和AKT的磷酸化对原发性抗磷脂抗体综合征肾病患者肾血管的mTORC通路活化进行评估,这两种物质的磷酸化分别体现了mTORC1 和 mTORC2的活化。结果发现对照组血管切片鲜有S6RP和AKT 磷酸化,但多数抗磷脂抗体综合征患者其结果为阳性,损伤越严重、阳性率越高;且mTORC1 和 mTORC2 活化通常发生在同一血管上。

免疫组化联合形态学分析证实存在 S6RP 或 AKT磷酸化的细胞与血管内皮细胞形态相似。而肾小球内皮细胞中无S6RP 和AKT的磷酸化。

在狼疮肾炎( III 或IV型)伴或不伴抗磷脂抗体综合征组,mTORC通路在那些继发性抗磷脂抗体综合征肾病的患者中有显著活化。

血管mTORC通路活化可诱发细胞增生

研究发现抗磷脂抗体综合征肾病的患者中有内膜细胞增生,而这种增生可能是导致相应病变的原因。抗Ki-67抗体选择性表达在增殖细胞中,抗α-平滑肌肌动蛋白抗体可以在内皮细胞和血管平滑肌细胞中表达,对两者进行免疫染色,表明两者的存在相互作用。

抗磷脂抗体和mTORC通路活化

为了明确抗磷脂抗体与mTORC的活化是否直接相关,研究者培养了HMEC-1(一种人的微血管内皮细胞系),或与正常的人IgG抗体,或与有临床血管损伤的抗磷脂抗体综合征患者体内提取的多克隆抗磷脂抗体进行反应。使用十二烷硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳来对IgG的纯度进行评估。

研究发现从患者身上提取的多克隆抗磷脂抗可显著体诱导S6RP 和AKT磷酸化,而正常人IgG作用没有发生相应改变。 同时发现,抗磷脂抗体的滴度和AKT磷酸化的水平和抗β2-GPI抗体水平明显相关。

需要考虑的是,抗HLA抗体、特别是抗HLA I抗体,可能会在体液免疫中活化内皮细胞mTORC 通路;但是,健康的志愿者和抗磷脂抗体综合征的患者体内均存在这种抗体,因此抗HLA抗体并不是血管内皮细胞mTORC活化的原因。

当用选择性的mTOR激酶抑制剂PP242处理细胞后,AKT (Ser473) 和S6RP的磷酸化被完全抑制。使用PI3K抑制剂LY294002预处理后,AKT的磷酸化同样被完全抑制,表明补充AKT对抗磷脂抗体诱导的mTORC信号是必要的。

我们观察到抗磷脂抗体可刺激Thr308上AKT的磷酸化,在人微血管内皮细胞暴露在雷帕霉素1小时后抑制了由抗磷脂抗体所诱导的S6RP的磷酸化,但并没有抑制AKT 的磷酸化。 然而,当使用抗磷脂抗体处理的细胞暴露于雷帕霉素48小时后,S6RP和AKT (Ser473) 磷酰化都被抑制,细胞仍可以存活且表型无异常。

雷帕霉素的作用

在37个抗磷脂抗体阳性并行肾移植的患者中,有10个使用雷帕霉素,其对照组的74人中有18个使用雷帕霉素。在移植术后第3个月和第12个月行肾活检,活检表明未使用雷帕霉素的抗磷脂抗体阳性的患者相对于那些阴性患者而言,其血管内皮细胞中S6RP和AKT (Ser473)磷酸化明显增加。

而那些使用雷帕霉素的抗磷脂抗体阳性的患者,S6RP and AKT磷酰化明显减少。且肾活检示这些患者无内皮细胞和血管平滑肌细胞增生。在移植后的第一年,这样的患者相对于没有使用雷帕霉素的患者来说几乎没有新的肾损。

对抗磷脂抗体阳性患者的研究发现雷帕霉素可以保护移植肾免受损伤。在移植后的12个月,未使用雷帕霉素者的GFR及碘海醇清除率均显著下降,但是使用组的GFR没有明显改变。 平均随访82±35 个月后,使用雷帕霉素的抗磷脂抗体综合征患者的生存率(Kaplan–Meier分析)明显提高。但雷帕霉素的使用并没有增加那些抗磷脂抗体阴性患者的存活率。

所有抗磷脂抗体阳性的移植患者均使用了抗凝药,在这些血管受损的患者中并没有发现血栓形成。所有患者的血中神经钙蛋白抑制因子的水平相似,这也表明这一药物在mTORC通路中无明显作用。

灾难性抗磷脂抗体综合征中mTORC通路的活化

为了研究西罗莫司在除肾脏之外的器官有无保护作用时,研究评估了灾难性抗磷脂抗体综合征患者mTORC通路活化的血管改变。在这些患者中发现,严重的血管管腔收缩与内皮细胞增生相关。免疫组化分析表明受损血管的内皮细胞S6RP 和 AKT磷酸化明显增加。

讨论

严重抗磷脂抗体综合征内膜增生的分子机制未明。在充分抗凝的情况下,损伤仍旧存在,表明抗凝并不是这一损伤的关键环节。基于临床实验和体外研究发现,mTORC通路在与抗磷脂抗体综合征相关的血管损伤中起到了关键的作用。内皮增生与mTORC1 和 mTORC2活化相关,且损伤越严重活化越明显。

在使用雷帕霉素并行肾移植的抗磷脂抗体综合征患者中,抑制mTORC通路的活化可以阻止血管的损伤。抗磷脂抗体导致细胞活化可能是由于抗磷脂抗体先与β2-GPI相连,之后与介导细胞外信号的膜受体结合,最终活化内皮细胞和血小板。数据表明,不同的信号通路在内皮增生的过程中发挥作用,且mTORC通路起到了关键的作用。

抗磷脂抗体以 PI3K-依赖的方式活化细胞膜上的AKT,抗磷脂抗体β-2GP-I复合体活化相关受体诱发PI3K信号通路的活化。因此,不同信号通路的活化促使内皮细胞增生或形成血栓。

抗磷脂抗体综合征的患者的首要目标就是抑制血栓的形成。然而,充分的抗凝治疗后,一些患者仍出现肾脏损伤,并且在移植后仍然出现并且导致移植器官的损伤。数据表明在抗磷脂抗体阳性的肾移植的患者中,抑制mTORC 通路可保护移植器官,更重要的是,通过抑制内皮增生防止移植物的损伤。

mTORC通路在肾脏病理生理中起到了多种作用。本研究表明,特定的mTORC分子通路,通过诱导内膜增生而导致了抗磷脂抗体综合征这一症候群中最严重的损伤。

查看信源地址

编辑: rheum204

版权声明

本网站所有注明“来源:丁香园”的文字、图片和音视频资料,版权均属于丁香园所有,非经授权,任何媒体、网站或个人不得转载,授权转载时须注明“来源:丁香园”。本网所有转载文章系出于传递更多信息之目的,且明确注明来源和作者,不希望被转载的媒体或个人可与我们联系,我们将立即进行删除处理。同时转载内容不代表本站立场。